AAV/腺相关病毒/病毒包装/AAV载体/腺相关病毒包装

和元上海腺相关病毒的生产和质控采取了国际学术界公认的标准流程，采用三质粒系统在293T细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速离心纯化，并通过qPCR对病毒基因拷贝进行滴定。另外，我们也可以根据使用者要求，提供蛋白染色检测衣壳蛋白的完整性以及内毒素含量等。一般情况下rAAV的滴度在10¹²-10¹³v.g./ml，完全可以满足各类整体实验的使用要求。

腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV）是一类细小病毒，基因组为单链DNA，对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。 在人类和小鼠中，AAV感染可以介导外源基因发生低频率（不高于2%）的定向整合，插入的位置一般在19号染色体短臂（人类基因组中的AAV S1和鼠中的ROSA26位点）。病毒基因组在不发生整合的情况下在被感染细胞内形成伴随体，可以随染色体复制。因此无论整合的外源DNA还是不整合的外源DNA都可以在细胞核内稳定的复制和转录，产生RNA产物和蛋白产物（图1）。

腺相关病毒包装和感染过程

根据衣壳蛋白的蛋白结构和所结合的细胞外受体分子不同，可以分为数十种血清型。不同血清型的AAV组织感染嗜亲性各不相同，表现出一定的器官靶向特异性（表1）。

 

表1 不同血清型AAV的组织嗜亲性

血清型	组织亲和性
AAV1	肌肉，心脏，骨骼肌（包括心肌），神经组织
AAV2	中枢神经，肌肉，肝脏，脑组织，眼
AAV3	肌肉，肝脏，肺，眼
AAV4	中枢神经，肌肉，脑，眼
AAV5	中枢神经，肺，眼，关节滑膜，胰腺
AAV6	心脏，肺
AAV7	肝脏，肌肉
AAV8	中枢神经，肝脏，肌肉，眼
AAV9	中枢神经，肝脏，心脏，肌肉，肺（包括肺泡）
DJ	肝脏，肾脏，肺，视网膜
DJ/8	中枢神经，肝脏，肌肉，眼
Rh10	中枢神经，肝脏，心脏，肌肉，肺

AAV可以有效地感染多种组织类型，并且免疫原性极低，目前尚无由AAV引起的人类及哺乳动物疾病报道。因此，AAV是一种高效和安全的体外及体内基因转导工具。尤其在整体水平研究中，与其他常用病毒工具载体相比，AAV具有感染过程温和长效的表达能力，而成为基因操作的利器（表2）。

 

表2 不同病毒的生物学特性比较

	慢病毒	腺相关病毒	腺病毒	逆转录病毒
包膜	有	无	有	有
颗粒直径	90-100 nm	20-30 nm	60-90nm	90-100 nm
基因组	dsRNA	ssDNA	dsDNA	dsRNA
表达起始时间	48-72h	72-96h	24-48h	48-72h
表达持续时间	> 2 months	> 2 months	< 1 month	> 2 months
整合方式	随机高频整合	定向低频整合	非整合	随机高频整合

目前，和元上海客户使用公司AAV在Science、Nature Medicine、Neuroscience、Cell、PNAS、Cell Research、Nature Communications等国际著名杂志发表。合作单位包括清华大学、北京大学、中科院神经所、浙江大学、四川大学、同济大学、第二军医大学等，合作企业包括GE医疗、阿斯利康、药敏康德等。

 

AAV在体内应用效果

其他相关应用

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